Инструкция по применению теста

 Требуемые материалы для проведения теста (не поставляемые вместе с набором)

·        одноразовые наконечники для пипеток с объемом  10, 20 и 1000 мкл

·        стандартный набор лабораторных стеклянных изделий

·        свежедистиллированная вода

·        вортэкс (Whirlmix)

·        одноразовые стеклянные или пластмассовые пробирки для разведения проб сыворотки крови

·        абсорбирующие бумажные полотенца

·        шэйкер

·        пинцеты   

Требования к пробам сыворотки пациента

Свежесобранная сыворотка крови, предназначенная для тестирования должна храниться при температуре 2 – 8 °C до проведения тестирования.

Если предполагается длительное (более 48 часов) хранение проб сыворотки, они должны быть заморожены и храниться при температуре –20 °C, или иметь консервант - 0,1 % натрия азид (sodium azide).

Загрязненная, гемолизированная или липемическая сыворотка может дать неправильные результаты.

Инактивация теплом при 56 °C не должно влиять на точность результата.

Iинструкции по приготовлению реагентов и их хранению

Все запечатанные компоненты теста должны использоваться до окончания срока годности, нанесенного на упаковку при условии хранения набора при температуре  2 ‑ 8 °C.

Мембраны должны храниться при комнатной температуре после первого открытия упаковки.

Приготовление буфера для разведения пробы сыворотки крови (SDW)

Добавьте 20 мл концентрированного буфера к 180 мл дистиллированной воды (= 200 мл) и хорошо перемешайте полученный раствор. Раствор пригоден для употребления в течение 2 недель при хранении при температуре 2 – 8 °C.

Для проведения анализа 1 вестерноблота разведите 2 мл концентрированного буфера в 18 мл дистиллированной воды, 2 вестрнблотов - разведите 4 мл концентрированного буфера в 36 мл дистиллированной воды

Коньюгат

Во время проведения первой инкубации пробы сыворотки крови, разведите коньюгат:

Нет необходимости доводить коньюгат до комнатной температуры перед разведением. Рекомендуется достать коньюгат из холодильника, взять пипеткой  необходимое количество из упаковки и немедленно поставить коньюгат обратно в холодильник. После разведения коньюгат стабилен для применения в течение 1 часа при комнатной температуре (22 °C).

 Порядок проведения теста вестернблот

1. Наклоните инкубатор и слейте жидкость, а остаток жидкости удалите из всех ячеек инкубатора методом аспирации.
2. Следите за тем, что содержимое из одной ячейки не попало в другую ячейку.
3. Добавьте 1 мл SDW буфера, поставьте на шэйкер на несколько секунд, затем удалите буфер методом аспирации.
4. Добавьте 2 мл SDW буфера, поставьте на шэйкер на 3 минуты, затем удалите буфер методом аспирации. Повторите этот этап 2 раза.
5. Переверните инкубатор и постучите на фильтровальную бумагу до тех пор, пока на ней не будет оставаться следов жидкости.

·        Во время проведения инкубации пробы сыворотки крови разведите коньюгат:

Нет необходимости доводить коньюгат до комнатной температуры перед разведением. Рекомендуется достать коньюгат из холодильника, взять пипеткой  необходимое количество из упаковки и немедленно поставить коньюгат обратно в холодильник. После разведения коньюгат стабилен для применения в течение 1 часа при комнатной температуре (22 °C).