Вестернблот Herpes Simplex Virus II

Вестернблот для определения IgG и IgM антител против различных антигенов вируса простого герпеса I типа

Краткое изложение и объяснение теста

Группа герпетических вирусов  включает в себя большое количество ДНК вирусов, встречающихся в различных разновидностях. 6 из них встречаются у человека. 2 из этих 6 вирусов, вирус простого герпеса I типа (herpes simplex virus type 1 – HSV-1) и вирус простого герпеса II типа (herpes simplex virus type 2 – HSV-2), очень похожи между собой. Они имею до 50 %  гомологии в своем геноме, а вирионы имеют много похожих антигенных детерминант.

Оба вируса могут вызывать инфекцию в следующих областях:

Вирус простого герпеса I типа чаще встречается в трех последних областях, а вирус простого герпеса II типа чаще вызывает поражение ано-генитальной области.

Инфицирование вирусом простого герпеса I типа обычно происходит в первые 10 лет жизни, при этом первичное инфицирование в основном протекает бессимптомно. Только 10% инфицированных имеют клинические проявления.

Первичная инфекция обычно проявляется гингивитом и стоматитом и/или фарингитом. При этом может отмечаться поражение кожного покрова лицевой области. В продромальном периоде обычно отмечается наличие зуда и покалывания примерно за 5 дней до появления  характерных групп пузырьков на покрасневшей коже. Через несколько дней после появления пузырьков они превращаются в эрозии и заживают через 5 – 10 дней с образованием корки на раневой поверхности. Первичная инфекция может сопровождаться общим недомоганием, слабостью и температурой. Редким, однако, очень серьезным осложнением, является развитие герпетического энцефалита с очень высоким процентом смертельных исходов.

После первичной инфекции вирус простого герпеса I типа находит убежище в ганглиях тройничного нерва, где он находится в латентном состоянии.

При реактивации инфекции, под влиянием таких факторов как повышенное солнечное облучение, менструации, эмоциональные стрессы, физическая перегрузка, вирус проявляет себя поражением кожи в области губ и/или вокруг рта. Рецидивирующий герпес лабиалис является классическим проявлением инфекции, однако он обычно локализован и имеет значительно менее тяжелое течение, чем первичная инфекция. Однако у иммунокомпроментированных пациентов реактивация инфекции может вести к персистирующим и прогрессирующим язвам на губах и вокруг рта, сопровождающимися некрозом, кровотечением и сильным болевым синдромом. Более того, при реактивации инфекция может диссеминировать, вызывая пневмонию, гепатит, панкреатит и энцефалит вследствие вирусемии.

Несмотря на то, что в основном генитальная герпетическая инфекция вызывается вирусом герпеса II типа, около 20 %  приходится на долю вируса герпеса I типа. Тяжесть и продолжительность первичной герпетической генитальной инфекции вызванной вирусом простого герпеса I  или II типов не отличаются между собой. Однако частота рецидива генитального герпеса при инфицировании вирусом простого герпеса I типа значительно ниже, чем при инфицировании вирусом простого герпеса II типа. Более того, симптомы реактивации генитальной герпетической инфекции при инфицировании вирусом простого герпеса I типа обычно слабо выражены. Поэтому лечение генитальной герпетической инфекции при инфицировании вирусом простого герпеса I типа не имеет смысла. В отличии от этого, при инфицировании вирусом простого герпеса II типа, необходимо применение противовирусных препаратов, таких как ацикловир (зовиракс).  Таким образом, дифференциация I м II типа вируса простого герпеса является важным моментом в выборе адекватной терапии.

Литература

1. Corey, L., Spear, P. G. Infections with herpes simplex virus. N Engl J Med 314, 749 – 754 (1986)

2. Greenberg, M. S., Friedmann, H., Cohen, S. G. et. al. A comparative study of herpes  simplex infections in renal transplant and leukemic patients. J Infect Dis 156, 280 – 287 (1987)

3. Scully, C. Orofacial herpes simplex infections: currents concepts in the epidemiology, pathogenesis, and treatment, and disorders in which the virus may be implicated. Oral Surg Oral Med Oral Pathol 68, 701 – 710 (1989)

4. Vestergaard, B. F. Laboratory diagnosis of herpes viruses Scand J Infect Dis Suppl. 47, 22 – 32 (1985)

5. Ashley, R., Benedetti, J., Corey, L. Humoral immune response to HSV 1 and HSV 2 viral proteins in patients with primary genital herpes. J Med Virol 17, 153 – 166 (1985)

6. Roizman, B., Norrild, B., Chan, C., Pereira, L. Identification and preliminary mapping with monoclonal antibodies of a herpes simplex virus 2 glycoprotein lacking a known type 2 counterpart. Virology 133, 242 – 247 (1984)

7. Rabenau H., Eibner J., Weber B., Bahrdt B., Doerr H.W. Detection of Herpes simplex Virus (HSV) type specific antibodies by a microtechnique westernblot assay. Lab. med. 16, 327 – 331 (1992)

8. Ho, D. W. T., Field, P. R., Irving, W. L., Packham, D. R., Cunningham A. L. Detection of immunoglobulin M antibodies to glycoprotein G-2 by westernblot (Immunoblot) for diagnosis of initial Herpes simplex Virus type 2 genital infections. J. Clin. Microbiol., Dec. 1993, 3157 – 3164

Вестернблот для определения IgG и IgM антител против различных антигенов вируса простого герпеса I типа

Анализ получаемых на тестовой мембране полосок и интерпретация результатов

Пороговый уровень - Стандарт: IgM - 10 %, IgG - 20 %

С помощью данного вестернблота возможно дифференцировать следующие антигены  вируса простого герпеса 1 типа:

Этот белок высоко специфичен для HSV-1. Тем не менее, довольно редко может встречаться перекрестная реактивность к HSV-2, однако ни к каким другим вирусам перекрестная активность не отмечается. Титр антител к данному антигену возрастает на 7 – 14 день после начала инфекции. При наличии данной специфичной полоски 130 kD (gpC1) на блоте результаты теста считаются положительными.

Маркер инфекции вирусом простого герпеса (I и II типа), относительно специфический. Во многих случаях может выявляться параллельно появлению gpC1 антител.

Антитела против данных антигенов являются ранним маркером инфицирования вирусом простого герпеса. IgM антитела против антигенов 40 kD  и 65 kD возрастают уже к 3 – 7 дню от начала инфекции, IgG антитела против антигенов 40 kD  и 65 kD – к 7 – 10 дню от начала инфекции. Они не специфичны для вируса простого герпеса I типа и имеют перекрестную реакцию к вирусу простого герпеса II типа. Таким образом, выявление данных антител подтверждают положительные IgM результаты, однако данный маркер не может дифференцировать вирус простого герпеса 1 типа и 2 типа. Наличие антител к данным антигенам 40 kD  и 65 kD является только доказательством инфицирования вирусом герпеса без определения его типа.

Образование IgM антител к вирусу простого герпеса 1 типа происходит значительно слабее, чем  образование IgG антител, поэтому наличие даже слабо выраженных полосок на блоте должно приниматься во внимание.

Критерии интерпретации теста

Положительный результат теста на выявление инфицирования вирусом простого герпеса I типа считается при выявлении на мембране вестернблота специфической gpС1 полоски.

Наличие IgM-антител против антигенов 40 kDa и 65 kDa является самым ранним ответом после начала инфекции. Они могут выявляться уже через 3 – 7 дней после первичного инфицирования. Соответствующие IgG-антитела растут через 7 – 10 дней.  К сожалению, выявление данных антител не позволяет дифференцировать между вирусами простого герпеса I и II типа. Антитела против высокомолекулярных антигенов (130 kDa - Glycoprotein C 1 - gpC1 и 75 kDa Glycoprotein C 2 -gpC2) появляются только через 7 – 14 дней от начала инфекции. Если данные антитела не выявляются в первой пробе, необходимо повторить анализ через 5 – 7 дней.

Ограниченности метода

Корреляция между типом появляющихся поперечных полосок на мембране вестернблота, интенсивностью их окраски и тяжестью заболевания на сегодня не доказана.

Отрицательный результат теста не исключает возможности недавно перенесенной инфекции. Если у больного имеются клинические признаки заболевания, рекомендуется проведение теста на выявление IgM-антител. Если оба теста отрицательные, рекомендуется повторить тест через 6 – 8 дней для исключения замедленного иммунного ответа с выработкой антител.

E-mail: postmaster@westernblot.ru

Вы можете сделать данные тесты www.fides-lab.ru

Тел: 8 (495) 401 05 77

Москва, Алтуфьевское шоссе 9 (Метро Владыкино)